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土壤酸性蛋白酶活性檢測(cè)試劑盒分光光度法

簡(jiǎn)要描述:土壤酸性蛋白酶活性檢測(cè)試劑盒分光光度法本生本生生物公司供應(yīng):ELISA試劑盒,動(dòng)物血清,熒光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量離心管,進(jìn)口凍存管,細(xì)胞培養(yǎng)皿,培養(yǎng)板,培養(yǎng)瓶,進(jìn)口吸頭,儀器及手套,色譜耗材,針頭過濾器等。

  • 產(chǎn)品型號(hào):BC0860 50T/24S
  • 產(chǎn)       地:天津市
  • 更新時(shí)間:2023-02-21
  • 訪  問  量:3771
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  土壤酸性蛋白酶活性檢測(cè)試劑盒分光光度法 天津本生

  中文名稱:土壤酸性蛋白酶活性檢測(cè)試劑盒

  儲(chǔ)存條件2-8℃

  單位盒

  有效期6個(gè)月

  英文名稱Soil Acid Protease Activity Assay Kit

  檢測(cè)方法可見分光光度法 Spectrophotometer

  規(guī)格50T/24S

  產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

  試劑名稱 規(guī)格 保存條件

  試劑一 液體 20 mL×1 瓶 2-8°C保存

  試劑二 粉劑×1 瓶 2-8°C保存

  試劑三 液體 12 mL×1 瓶 2-8°C保存

  試劑四 液體 40 mL×1 瓶 2-8°C保存

  試劑五 液體 10 mL×1 瓶 2-8°C保存

  試劑六 液體 15 mL×1 瓶 2-8°C保存

  標(biāo)準(zhǔn)品 液體 1 mL×1 支 2-8°C保存

  溶液的配制:

  1、 試劑二:臨用前加入 10 mL 試劑六,沸水浴攪拌溶解后待用,用不完的試劑 2-8°C保存 1 個(gè)月。

  2、 標(biāo)準(zhǔn)品:20μmol/mL 酪AN酸溶液。

  產(chǎn)品說明:

  土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質(zhì)以及其他含蛋白質(zhì)氮的有機(jī)化合物的轉(zhuǎn)化,其水解產(chǎn)物是高等植物的氮源之一。土壤酸性蛋白酶在酸性環(huán)境下催化蛋白質(zhì)水解,與土壤有機(jī)質(zhì)含量、氮素及其他土壤性質(zhì)有關(guān)。酸性條件下,土壤酸性蛋白酶可將酪蛋白水解產(chǎn)生酪AN酸;在堿性條件下,酪an酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍(lán),在680nm有特征吸收峰。

  Casein Tyrosine Phosphomolybdic acid + Tyrosine Tungsten blue 680nm

  注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者

  增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

  需自備的儀器和用品:

  可見分光光度計(jì)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿、臺(tái)式離心機(jī)、研缽、蒸餾水、30-50

  目篩。

  操作步驟:

  一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))新鮮土樣自然風(fēng)干或 37°C烘箱風(fēng)干,過 30~50 目篩。

  二、測(cè)定步驟

  Soil acid protease,H+OH-

  1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至680nm,蒸餾水調(diào)零。

  2、 標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋:取10μL 20μmol/mL酪an酸標(biāo)準(zhǔn)液,加入990μL蒸餾水,充分混勻,配制成0.2μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液使用,現(xiàn)用現(xiàn)配。(實(shí)驗(yàn)中每管需要220μL,為減小實(shí)驗(yàn)誤差,故配制大體積。)

  3、 樣本測(cè)定

  試劑名稱 測(cè)定管 對(duì)照管 標(biāo)準(zhǔn)管 空白管

  風(fēng)干土樣(g) 0.1 0.1 - -

  試劑一(μL) 200 200 - -

  試劑二(μL) 100 - -

  充分混勻后,37°C水浴/恒溫培養(yǎng)箱中反應(yīng)24h,期間振蕩5-6 次,

  使土樣與反應(yīng)液充分接觸。 - -

  試劑三(μL) 200 200 - -

  試劑二(μL) - 100 - -

  混勻,10000rpm 室溫離心10min,取上清液待測(cè) - -上清液(μL) 220 220 - -

  0.2μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液(μL) - - 220 -

  蒸餾水(μL) - - - 220

  試劑四(μL) 650 650 650 650

  試劑五(μL) 130 130 130 130

  混勻,40°C水浴或恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng) 10min,10000rpm 室溫離心 10min,取上清液于 680nm 下讀取各管吸光值 A,分別記為 A 測(cè)定管、A 對(duì)照管、A 標(biāo)準(zhǔn)管、A 空白管,計(jì)算ΔA 測(cè)定=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管。(標(biāo)準(zhǔn)管、空白管只需測(cè) 1-2 次,每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管)

  三、土壤酸性蛋白酶活性計(jì)算

  單位定義:每天每g土樣中產(chǎn)生1μmol的酪an酸為一個(gè)土壤酸性蛋白酶活力單位。

  土壤酸性蛋白酶(U/g 土樣)=C標(biāo)準(zhǔn)×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V反總÷W÷T=0.1×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W

  C標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)管濃度,0.2μmol/mL;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.5mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1d;W:樣本質(zhì)量,g。

  注意事項(xiàng):

  當(dāng)吸光值大于1時(shí),建議將上清液用蒸餾水稀釋后進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算時(shí)注意乘以稀釋倍數(shù)。

  實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

  1、 分別稱取 2 份 0.1g 土樣于 1.5mLEP 管中,分別為對(duì)照管及測(cè)定管。按照測(cè)定步驟操作,使用 1mL 玻璃比色皿 測(cè) 定 吸 光 度 , 計(jì) 算 ΔA 測(cè) 定 =A 測(cè) 定 管 -A 對(duì) 照 管 =0.206-0.178=0.028 , ΔA 標(biāo) 準(zhǔn) =A 標(biāo) 準(zhǔn) 管 -A 空 白 管=0.540-0.028=0.512,按土壤質(zhì)量計(jì)算酶活得:

  土壤酸性蛋白酶(U/g 土樣)= 0.1×ΔA 測(cè)定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn)÷W= 0.1×0.028÷0.512÷0.1= 0.0547U/g 土樣。

  2、 分別稱取 2 份 0.1g 三葉草土樣于 1.5mLEP 管中,分別為對(duì)照管及測(cè)定管。按照測(cè)定步驟操作,使用 1mL 玻璃比色皿測(cè)定吸光度,計(jì)算ΔA 測(cè)定=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管=0.831-0.612=0.219,ΔA 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管=0.540-0.028=0.512,按土壤質(zhì)量計(jì)算酶活得:

  土壤酸性蛋白酶(U/g 土樣)= 0.1×ΔA 測(cè)定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn)÷W= 0.1×0.219÷0.512÷0.1=0.0313 U/g 土樣。

  相關(guān)系列產(chǎn)品:

  BC0880/BC0885 土壤堿性蛋白酶(S-ALPT)活性檢測(cè)試劑盒

  測(cè)定意義:土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質(zhì)以及其他含蛋白質(zhì)氮的有機(jī)化合物的轉(zhuǎn)化,其水解產(chǎn)物是高等植物的氮源之一。S-ACPT 在酸性環(huán)境下催化蛋白質(zhì)水解,與土壤有機(jī)質(zhì)含量、氮素及其他土壤性質(zhì)有關(guān)。

  測(cè)定原理:酸性條件下,S-ACPT 可將酪蛋白水解產(chǎn)生酪an酸;在堿性條件下,酪an酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍(lán);在680nm 有特征吸收峰。

  所需儀器及設(shè)備:可見分光光度計(jì)、水浴鍋、磁力攪拌器、可調(diào)式移液槍、1mL 玻璃比色皿、蒸餾水。

  備注:

  以上數(shù)據(jù)均來自公開文獻(xiàn), 暫未進(jìn)行獨(dú)立驗(yàn)證, 僅供參考。

  土壤酸性蛋白酶活性檢測(cè)試劑盒分光光度法 本生生物公司供應(yīng):熒光定量PCR耗材,細(xì)胞培養(yǎng)類,核酸提取耗材,試劑包裝類,生物試劑,色素,原料,抗原抗體,試劑盒等,通用耗材包括深孔板、96孔硅膠墊、吸頭、封板膜、玻片、試管、量杯、試劑槽、離心管、移液器等。


 


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